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RT-PCR 相关betway必威娱乐城

RNAfast200 总RNA极速抽提betway必威娱乐城盒

发布日期:2015-02-13阅读次数:1839

RNAfast200    RNA 极速抽提betway必威娱乐城盒

适用范围:动植物组织、细胞、细菌、病毒等Catalog no.220010 50

性能介绍

样本量

培养细胞<1×107,组织<10mg,细菌<1×109,体液据所含细胞量

耗时

10min 

产量

100-300μg/1×107细胞,1-6μg/ mg组织,50-200μg/1×109细菌

洗脱体积

25-50μl

纯度

OD260/OD280: 1.92.1

特点

1. 目前已知速度最快、步骤最少的总RNA提取betway必威娱乐城盒2. 提取产物中DNA、蛋白质及盐类污染极少,4℃放置5天无显著降解3.Trizol相比,提取的RNA质量高,不同提取操作批次间变异小4.适用性广,可同时适用于动物组织、细胞、细菌、病毒、血浆、体液等5.  产品全线除RNase处理及防护,所有容器及betway必威娱乐城除Rnase处理

用途

RT-PCR RQ-PCRRPAcDNA合成, cDNA文库构建,表达芯片分析

 

betway必威娱乐城盒组成

平衡液

5ml

裂解液RA2

30ml

洗液RW

60ml(使用前加入45ml无水乙醇)

洗脱液(RNase-free H2O

10ml

内套柱,外套柱

50

组织研磨器(筛网)

需要时另配(提取组织RNA时用)

说明书

1

 

技术支持:使用中遇到任何问题或建议,请使用E-mailxfyangbio@163.com或者13484545009)与我们的技术支持部门联系。资深技术支持将在2个工作日内给予答复。

 

 

 

 

 

操作流程

1. 关于平衡液的使用

   核酸吸附硅胶膜柱子长期放置过程中会老化而影响其核酸的结合能力。硅胶柱经平衡液预处理后可大大减少柱子中硅胶膜的憎水基团,提高核酸的结合能力。从而提高硅胶柱子回收效率或者产量。平衡液是强碱性溶液,若不小心碰到,请用大量自来水清洗。用完后需盖紧瓶盖,以免接触空气。室温保存。在保存过程中可能有沉淀生成,请加热至37℃使沉淀完全消失。

   使用方法:吸取100μl的平衡液至柱子中。13000 rpm离心1分钟,倒掉收集管中废液,将吸附柱子重新放回收集管。此时平衡液预处理柱子完毕。接后续的操作步骤。

2 样本预处理

 培养细胞:如果是贴壁细胞,直接弃去上清(6孔板单孔),用滤纸吸走多余液体,而悬浮培养细胞或经消化脱落的贴壁细胞离心500g离心5分钟)收集,去上清,留下细胞团块,控制细胞<1×10

 组织块:新分离的组织或RNAwait中冻存的组织,放入组织研磨器(筛网)中,根据组织重量加入生理盐水(<50mg组织/ml,例如50mg组织加入生理盐水1ml以上),用研磨棒将组织轻轻研磨过钢网,立即收集过网滤液按500 g离心5分钟收集细胞,去上清,留下细胞团块。或者使用本公司的RNAfast1000betway必威娱乐城盒可以获得大量组织中的RNA

 细菌:取培养良好的细菌菌液100ul直接放入1.5ml eppendorf管中后进行提取。较稀的菌液取0.5-1ml离心后留下细菌团块及大约100ul上清,充分振荡悬浮细菌,直至没有细胞团块(重要)。

 病毒:取血清或血浆等样本液100ul,放入1.5ml eppendorf管中后进行提取。样本中有较多红细胞时需先低速离心去除红细胞。

 植物组织:鲜嫩植物组织(50mg)在液氮中研磨粉碎,待液氮蒸发后加入1ml生理盐水混匀,取100ul1.5ml eppendorf管中。

 抗凝全血及骨髓:先用淋巴细胞分离液分离获得的白细胞后,按照上述培养细胞的方法操作。

 血浆、腹胸水、脑脊液、羊水等:样本液混匀后直接吸取100ul放入1.5mleppendorf管中后进行提取,样本中应无红细胞或仅有少量红细胞,否则需先低速离心去除红细胞。或取腹胸水、脑脊液、羊水等大量液体样本离心,留下底部细胞及100ul上清,充分吹打混匀后吸取100ul放入1.5ml eppendorf管中后。

3.RNA提取

1) 处理好的样中,加入裂解液RA2500μl,充分吹打混匀5-10次,静置1min

2) 将样裂解物全部吸入或倒入内套管(已插在外套管),13500 g离心1min

3) 取出内套管外套管中液体后放回内套管,加入500 μl洗液RW13500 g离心1min

4) 重复步骤3再洗一次。

5)  取出内套管外套管中液体后放回内套管,不加洗液RW13500g离心1min

6) 内套管移入新的1.5ml eppendorf,在中央加入洗脱液(RNase-free H2O25-50μl

7) 室温静置5min后,13500 g离心1min,获得总RNA

实验操作前请先认真阅读

 betway必威娱乐城盒室温保存,保质期2年。

 洗液瓶中已加入15ml缓冲液,首次使用时应加入45ml无污染的分析纯无水乙醇,用后拧紧瓶盖。

 室温或4℃离心。提取过程中的离心速度为12,000rpm-14,000rpm,以eppendorf 5417离心机为例,12,000rpm13,362g

 操作要戴手套及口罩特别重要,或者在在超净台中操作,可以有效的避免操作中RNA酶污染。移液枪用无水乙醇擦拭以保证洁净无RNA酶污染。大部分新拆封的移液枪头和eppendorf管可以直接使用。

 1-2×106细胞及3-5mg组织提取的RNA量通常达10-30ug,足够用于数次RT-PCR反应,更多的样本会增加DNA污染。

 样本量大时推荐使用专用的RNAfast1000betway必威娱乐城盒提取。

 公司推出的组织研磨法提取RNA适用于大部分动物组织。经钢网研磨后的组织悬液应立即提取。

 本betway必威娱乐城盒适用于从小量组织提取RNA,大量组织提取RNA推荐使用专用的RNAfast1000betway必威娱乐城盒提取。

 冻存的血液样本,1-5ml的全血或骨髓样本,推荐使用专用的RNAfast1000betway必威娱乐城盒提取。

 样本中加入裂解液RA2液后,如出现白色絮状、丝状沉淀或大量不溶解的颗粒,这是由于加入RA2液前没有充分振荡混匀细胞悬液,或者是因为样本量过大,会降低RNA的得率,但一般不影响RNA质量。

  样本裂解物加入内套管中离心1min结束后,如内套管中仍有液体,表明样本超量或裂解不完全导致吸附膜阻塞。处理方案是:a.减少样本量;b.加入RA2液后充分震荡;c.如已发生阻塞又不想放弃此标本,可用加样枪头划破内套管膜的表层,再重新离心1min

 个别情况下获得的RNA有明显的DNA污染,大部分原因是细胞量过大,或是因为加入的样本的体积远远偏离100μl,或者因为某些样本的特殊性质。

 步骤6尽量保证在膜中央加入洗脱液,低于25μl将不能保证吸附膜被充分浸润。本betway必威娱乐城盒提供的洗脱液为pH7. 6

 

Origin:  Aidlab Biotechnology,  Inc of China

Distributor: Pioneer Biotechnolgy,Inc 

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