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技术服务

荧光定量PCR-相对定量SYBR Green I 染料法

发布日期:2014-12-27阅读次数:1459
 相对定量(mRNA表达量分析):基因表达的研究一般采用相对定量的方法。相对定量法必须对样品的目的基因和内参基因同时分别进行定量,然后求出对于内参基因的目的基因的相对量。通过对样品间的目的基因的相对量进行比较,可以对不同样品间的mRNA进行表达量分析。内参基因通常选用表达量相对恒定的Housekeeping Gene,如:GAPDH、β-actin等。通过同时对内参基因的实时检测,可以对样品之间由于起始细胞数不同、或RNA提取效率的不同等造成的RNA量误差进行校正,达到在严格意义上对样品之间的mRNA表达量进行分析之目的。
  SYBR Green I是一种与双链DNA小沟结合的荧光染料,SYBR Green I只与双链DNA结合才能发出荧光,而不掺入链中的SYBR染料分子不会发射任何荧光信号,荧光信号与双链DNA分子数成正比,随着扩增产物增加而增加,荧光信号的强度代表了反应体系中双链DNA分子的数量。
样品要求
  客户需提供组织、细胞、血液等样品材料,或纯化好的总RNA或总DNA,反转录好的cDNA样品,具体要求如下:
材料种类 样品要求 起始量
血液 新鲜血液及抗凝剂处理的全血 1ml
培养细胞 离心收集的细胞 1x107
动物组织 一般材料 100mg
植物 一般材料 100mg
RNA OD260/OD280在1.9-2.1之间,完整性好 >1ug
DNA OD260/OD280在1.7-1.9之间,完整性好 >1ug
cDNA 内参基因检测成功 >20ul

服务内容
  以荧光定量PCR方法对样本基因表达进行相对定量。

服务价格

服务内容 价格 周期
每基因≤10样品 3-4周
每基因10-20样品 4-5周
每基因>20样品 4-5周
实验流程
  1.RNA/DNA提取。
  2.将RNA逆转录成cDNA。
  3.随机选择一个样品进行预实验,筛选引物,优化程序。
  4.荧光定量PCR正式试验。
  5.提交报告,原始Ct值。
服务优势
 ·先进的仪器,优质的betway必威娱乐城,专业的团队,实验结果更可靠。
 ·免费设计优化引物,使定量PCR反应扩增效率达到90%以上,使相对定量结果更可靠。
终产品
 ·目的基因剩余引物(上游引物和下游引物,合成量≥2OD);
 ·目的基因引物序列;
 ·相对定量实验报告。
服务说明
 ·客户提供基因序列。
 ·以上报价是针对Human、Mouse、Rat三个生物物种采用染料嵌合荧光法的报价。如果是此三种生物物种以外的物种,具体价格请垂询。
 ·以上报价是以提取的核酸(DNA或cDNA)为起始材料设定的,如果需要进行核酸纯化,费用另计。
 ·如因实验材料等非本公司原因造成某实验步骤失败,使实验提前终止,已启动的实验项目仍正常收费。