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技术服务

Western Blot 全套技术服务

发布日期:2014-12-27阅读次数:1848
   

 印迹(immunoblotting)又称蛋白质印迹(western blot),它是根据抗原抗体的特异性结合检测复杂样品中的某种蛋白的方法。western blot 是在凝胶电泳和固相免疫测定技术基础上发展起来的一种新的免疫生化技术。由于免疫印迹(western blot)具有 SDS-PAGE 的高分辨力和固相免疫测定的高特异性和敏感性,现已成为蛋白分析的一种常规技术。免疫印迹(western blot)常用于鉴定某种蛋白,并能对蛋白进行定性和半定量分析。

 

        陕西betway88客户端生物为您提供全套免疫印迹(western blot)技术服务和相关的betway必威娱乐城耗材。主要实验步骤如下:

1. 蛋白质抽提
实验对象为组织样品,取适量(50~100mg)新鲜组织样品或正确保存的组  织样品,加 1ml 含蛋白酶抑制剂的总蛋白抽提betway必威娱乐城(或核蛋白抽提betway必威娱乐城),匀浆后抽提总蛋白(或核蛋白)。实验对象为细胞样品,每份样品取 1×1061×107 细胞,PBS清洗细胞,去      PBS 0.5ml~1ml 含蛋白酶抑制剂的总蛋白抽提betway必威娱乐城(或核蛋白抽提betway必威娱乐城)  抽提总蛋白(或核蛋白)。

2. 蛋白质定量:按 BCA 蛋白质定量betway必威娱乐城盒操作说明操作,测定样品浓度。

3. 变性聚丙烯酰胺不连续凝胶电泳(SDS-PAGE):将准备好的样品液和预染蛋白 marker 分别上样,标准加进第一个孔中,电泳分离蛋白。

4. 蛋白质转移到 PVDF , Bio-Rad 蛋白转移装置说明组装滤纸凝胶纤维素夹层,30mA 恒流条件下,4°C 转移过夜。

5. western blot 膜的封闭和抗体孵育

o       膜在 5%脱脂奶粉溶液中室温孵育 1小时以封闭膜上的非特异结合。

o       封闭过的膜加入一抗44°C孵育 过夜,抗原抗体结合。

o       加入 HRP标记的二抗体以结合一抗,室温孵育膜 1 小时。加入HRP标记的内参   抗体可同时检测 内参含量。

6. western blot 结果检测:化学发光法检测,膜与化学发光底物孵育,经 X 胶片曝光显影。图片扫描保存为电脑文件,并用 GIS1000 分析软件将图片上每个特异条带灰度值的数字化。

7. western blot 数据分析:目的蛋白的灰度值除以内参的灰度值以校正误差,所得结果代表某样品的目的蛋白相对含量。

8. 提供实验报告,包括详细的实验方法及免疫印迹实验结果的相关数据。

 

收费标准:

服务项目

单价

蛋白提取

__30__/样品

浓度测定

__10__/样品

Western Blot

_2000_/张膜,9个样品(其中1marker9个实验样品)

_1000_/张膜,相同指标每增加9个

 

 

 

 

 

 

  

一抗由客户提供,其它betway必威娱乐城免费

实验要求:

1.客户提供一抗;

2.组织样本:采集新鲜组织,离体后30分钟内放入冻存管,先放入液氮中速冻数小时,后可转入-80度冰箱保存;

3.细胞样品:贴壁细胞:取大约1×107细胞,胰酶消化,PBS洗涤2次,放入液氮速冻,后可转入-80度冰箱保存;

4.悬浮细胞:离心收集细胞,PBS洗涤2次,放入液氮速冻,后可转入-80度冰箱保存。