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常见技术问题

法医样本DNA提取与保存常用方法

发布日期:2014-12-27阅读次数:2385
    在法医科学鉴定中用于RFLP分析和PCR扩增分型的DNA样本,其来源有新鲜或冻融全血、外周血淋巴细胞、血痕、精斑、毛发、组织块、骨、牙及其它样本,根据样本的来源所需提取DNA方法要有选择性,决不能一概而论,否则得不到需要的DNA。
    下面介绍四种类型:Chelex-100提取法应用于新鲜或者冻融血;盐析提取法应用于新鲜或冻融血液、血清中细菌、病毒的DNA;有机溶剂提取法应用于血痕、精斑、唾液斑、骨、牙组织;Glass milk方法应用于陈旧骨、遗骸、牙。
提取生物检材的DNA,关键在于选择恰当的DNA提取方法及生物样本采集的时限和正确的保存,防止外源性DNA的污染。
1.盐析法
无机盐提取法是用醋酸钠通过盐析原理去除非核酸物质,主要用于血液或血痕、精液或精斑、毛发样本,其优点是提取DNA回收率高,质量也好于Chelex-100方法。
2.有机溶剂法
通过酚-氯仿混合物萃取DNA溶液中的蛋白质类有机物质,而保留DNA于水相溶液中。适用所有生物检材,其提取DNA量比Chelex法和无机盐提取法多,且DNA分子结构完整,特别适合RFLP、测序等需要大分子DNA分析技术。
3.Chelex法
Chelex 100能有效除去非核酸有机物,主要用于提取全血或血痕、精液或精斑、混合斑、毛发、培养细胞等。但因生物样本来源不同其操作方法有所差异。
4.Glass milk法
在某些裂解液条件下,二氧化硅微粒特异捕获有机质溶液中的DNA分子,而得以分离生物检材的DNA,A260/A280多数在1.6~1.8之间,对陈旧骨核等样本提取DNA模板得率较有机溶剂法高。